詳細介紹
細胞名稱 小鼠骨髓瘤細胞,;P3/NSI/1-Ag4-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞系是 P3X63Ag8細胞的非分泌型克隆,可合成Kappa鏈但不分泌,,表達H-2d,,不需HAT。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 保持細胞密度在1×105~1×106 viable cells/ml之間,,每周換液2~3次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠骨髓瘤細胞,;P3/NSI/1-Ag4-1培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-NR2A/NMDAR2A/FITC 熒光素標(biāo)記谷氨酸受體2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-CEA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
活化白細胞粘附分子抗體 anti-CD166/ALCAM 0.2ml
Goat Anti-rat IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.5ml
FAT 英文名稱: 鈣粘蛋白家族成員7抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh PMCA1 細胞膜鈣ATP酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-CEA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體(包被)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Ret IgG ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白GMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr298) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 血管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
MBLR(Human Mannma binding lectin receptor) ELISA Kit 人甘露糖凝集素受體 96T
SerpinB2 英文名稱: 纖溶酶原激活物抑制因子2/血漿酶原激活酶抑制因子-2抗體 0.1ml
CARD17 英文名稱: 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 0.2ml
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr298) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Tie1(Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1) ELISA kit 人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪酸激酶1 96T
phospho-c-Raf (Ser259) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.5ml
MIP-5(Human macrophage inflammatory protein 5) ELISA Kit 人巨噬細胞炎性蛋白5Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CRK7 英文名稱: 細胞分裂周期2相關(guān)蛋白激酶7抗體 0.2ml
Anti-GDF-1 生長,、分化因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人胰腺癌標(biāo)志物CA242Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HOXB4 HOXB4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCP1/CCL2 單核細胞趨化蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
BACE1(Human Beta-site APP-Cleaving Enzyme 1) ELISA kit 人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1 96T
ROBLD3 英文名稱: 胞內(nèi)接頭蛋白P14抗體 0.1ml
C1orf123 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框123抗體 0.2ml
Anti-HOXB4 HOXB4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml