詳細介紹
細胞名稱 人源口腔鱗狀細胞癌細胞系,;TSCC1培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
人源口腔鱗狀細胞癌細胞系;TSCC1培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次),。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),,co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓、脫壁并浮起,,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104,。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化,、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值,。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-kit抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
葡萄糖轉運蛋白2抗體 Anti-GLUT2 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗IgM 0.3ml
FAM104B 英文名稱: FAM104B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-SHC(Tyr239/240) 磷酸化SH2結構域轉化蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
sE-selectin(Human soluble E-selectin) ELISA Kit 人可溶性E選擇素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GDF8/MSTN 生長分化因子8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC標記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
cTn- I (Human cardiac troponin I ) ELISA Kit 人心肌肌鈣蛋白Ⅰ 96T
Phospho-RSK2(Tyr529) 英文名稱: 磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 0.1ml
CDR2 英文名稱: 小腦變性相關蛋白2抗體 0.2ml
Anti-GDF8/MSTN 生長分化因子8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TPS(Human Total protein S) ELISA Kit 人總蛋白S 96T
SOX30 英文名稱: 轉錄因子SOX30抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh MTBP/MDM2BP 雙微體2癌基因結合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Collagen I 小鼠I型膠原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CD14 英文名稱: 內毒素受體抗體 0.1ml
Anti-DUSP1/MKP-1 原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Human Attacin,Att ELISA Kit 人抗菌肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-Smad2(Ser465) 磷酸化Smad2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-rabbit IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml
AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4 96T
Nck beta 英文名稱: NCK銜接蛋白2抗體 0.2ml
Bax 英文名稱: Bax抗體 0.1ml
Anti-phospho-Smad2(Ser465) 磷酸化Smad2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。