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牛β防御素elisa檢測試劑盒說明書
閱讀：57 發(fā)布時(shí)間：2024-11-26| 提 供 商 | 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 14.2KB |
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牛β防御素elisa檢測試劑盒說明書
產(chǎn)品名稱：兔血栓素A2elisa檢測試劑盒
英文名稱：Rabbit TXA2 ELISA Kit
規(guī)格：48T/96T
主要成分：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行,。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
elisa試劑盒常見組成部分：
1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP。
2）抗體：在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗),。
3）抗原：在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性,、親和力和純度,。主要有三類，即自然抗原,、人工合成抗原和基因重組抗原,。
4 人E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒包被：將免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯,、硝酸纖維薄膜等,；常用的方法有吸附法、化學(xué)交聯(lián)法及親和素間接包被法
5）固相載體：固相載體是ELISA中用以分離結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的主要手段,，應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能并且不改變其免疫活性,。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在di一,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在di一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從di一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為180 ng/L,，120 ng/L ，60 ng/L,，30 ng/,，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘,。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間好控制在5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5. 底物請避光保存,。
6. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
8. 本試劑不同批號組分不得混用,。
9.如需代測或者樣本暫時(shí)不測定，可立即低溫凍存,，溫度越低越好,，中間避免反復(fù)凍融，-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月,。
10.試劑使用須知：
11.（1）請參照相關(guān)法規(guī),、文獻(xiàn)、MSDS等信息,，理解并掌握好試劑的特性,，再進(jìn)行安全操作。
12.（2）通常購買試劑時(shí)一定要想到一次性用完,。若估算不足有剩余的話,，更加注意其他保管和管理。
13.（3）萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員,。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作,。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑,，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理,。
14.（4）購買后，請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),；做好預(yù)防顛倒,，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),，做好必要的安全對策,；對沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作,；必須帶好防護(hù)用具,，小心翼翼進(jìn)行操作。