化工儀器網(wǎng)
資料下載
鯉春病毒（SVCV）核酸檢測(cè)試劑盒技術(shù)參數(shù)
閱讀：129 發(fā)布時(shí)間：2020-3-20| 提 供 商 | 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.8KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 18次 | |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 129次 |
| 免費(fèi)下載 | 點(diǎn)擊下載 |
鯉春病毒(SVCV)核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
組成及試劑配制:
1,、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶,，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制,。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘,，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,，其濃度為200 U/L,，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L,，100 U/L,，50 U/L，25 U/L,，12.5 U/L,，6.25 U/L，3.12 U/L,，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L,。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可,，其余濃度以此類推,。
3、 樣品稀釋液：1×20ml,。
4,、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5,、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml,。
產(chǎn)品名稱鯉春病毒(SVCV)核酸檢測(cè)試劑盒
48T
電詢
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無(wú)菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水）,，用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè),，也可保存于-20℃待測(cè),。
鯉春病毒(SVCV)核酸檢測(cè)試劑盒【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,，具體操作參見(jiàn)該試劑盒說(shuō)明書(shū),。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,，加入300?l裂解液（Trizol）,，再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次,； 13000rpm離心15min,， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇,，顛倒混勻室溫靜置10min,， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇,，顛倒洗滌,，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清,，倒置于吸水紙上,，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部,，用微量加樣器盡量吸干液體,，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒,。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液,、DEPC-H2O,、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋,，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,，再按95℃×15sec→60℃×60sec,，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為25?l,。
熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道,。
樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1,、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集,；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,，-70℃以下可長(zhǎng)期保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3,、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸,。
鯉春病毒(SVCV)核酸檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶,、dNTP,、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度,。理論上,，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增,。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp,，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜,，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段,。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳,，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ),，否則會(huì)形成引物二聚體,，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性,。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。