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兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒技術(shù)參數(shù)

閱讀:161          發(fā)布時間:2019-7-19
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兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒檢測說明:
規(guī)格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個月
樣本:血清,、血漿、細(xì)胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓,、心房水、胸房水,、組織等,。
特點:敏感性高、特異性強,、重復(fù)性好,、試劑穩(wěn)定,、易保存,,操作簡便。
用途:用于測定血清,,血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性,。
種屬:人,、大鼠、小鼠,、兔子,、豬、犬,、猴,、馬、牛,、羊,、雞、鴨,、魚等,。
運輸方式:現(xiàn)貨供應(yīng),一般為快遞運輸,,江浙滬隔天到,,外地及偏遠(yuǎn)地方三至五天時間到貨。
檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,。
兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒標(biāo)本要求:
包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
1.血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
2.血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
3.尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實行,。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒操作步驟:
1,、使用前,,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2,、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4,、甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5,、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6,、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7、每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8,、取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值,。
兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒特點:
1,、專一性強??乖c抗體的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng),,而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測的對象是抗原(或抗體),,使用的抗體除標(biāo)記了酶以外,,與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無多大差別。
2,、靈敏度高,。由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,因此,,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),,顯示抗原與抗體的結(jié)合,大大提高了檢測的靈敏性,,使檢測水平接近放射免疫測定法,。
3、樣品易保存,。經(jīng)過酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,,因此有利于樣品的保存。
4,、結(jié)果易觀察,。對檢測結(jié)果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,,也可以用分光光度計進行比色測定,,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應(yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變,,從而引起被檢測物的顯示,。
5,、可以定量測定。溶液中的抗原物質(zhì),,應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進行比色測定,,依據(jù)光密度值的變化,可以定量,。預(yù)計用細(xì)胞分光光度計可對組織內(nèi)的抗原進行免疫酶技術(shù)的定量測定,。
6、可以大規(guī)模測定樣品,。如有成千上萬份樣品需要進行檢測,免疫酶技術(shù)都能在較短時間內(nèi)完成,。
7,、.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術(shù)來說,,不需要熒光顯微鏡,,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑,,普通實驗室及應(yīng)用單位均易購置,。

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