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大鼠正常食管上皮細(xì)胞；RNEEC/HL-012復(fù)蘇操作要點(diǎn)
閱讀：311 發(fā)布時(shí)間：2021-7-13大鼠正常食管上皮細(xì)胞,；RNEEC/HL-012復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基,。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,，裝滿37℃的水,，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）,。輕輕晃動(dòng)凍存管,，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中,，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染,。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),，輕輕吹打液體,，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度,，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡,。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),。
4）800rpm離心5min,，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，吹打制成細(xì)胞懸液,。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng),。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代,。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn),。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存,。-20℃不可超過1小時(shí),，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,，但存活率稍微降低一些。
GT115感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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S17-1感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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JM330感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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MG1655感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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DH5a 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
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SURE 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
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