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小鼠鈣結合蛋白（CR）酶聯(lián)免疫試劑盒用于檢測未知抗體的間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。
 
2.次日洗滌3次,。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,后一遍用DDW洗滌,。
 
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘,。
 
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
 
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。