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維素D2(VD2)ELISA試劑盒樣本處理及要求

1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
3.  細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或將標本放于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。