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ELISA試劑盒 的外源性物質(zhì)

      外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存不當(dāng)?shù)仍蛩?。如?biāo)本溶血,、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過(guò)久,、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響,。

（1）標(biāo)本溶血   

由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果,。為克服上述干擾作用,，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。

（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染   

因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,，因此,，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果,。

（3）標(biāo)本保存不當(dāng)

在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深,、甚至造成假陽(yáng)性；標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（如一天以上）,，有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,，ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集,；如不能立即測(cè)定，5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本,，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定,，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,，不可強(qiáng)烈振蕩,。

（4）標(biāo)本凝集不全

在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固,，18~24h*凝固,。臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,，易造成假陽(yáng)性結(jié)果,；這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在,，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

（5）人ELISA試劑盒標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響

抗凝劑（如肝素,，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用,。