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干細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗技術(shù)：形態(tài)學(xué)檢查法
閱讀：1442 發(fā)布時間：2018-5-29當(dāng)機(jī)體受到抗原的刺激時,，干細(xì)胞就可以轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞,。這種轉(zhuǎn)化在一定的程度上代表著機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài),。這種轉(zhuǎn)化也可在體外的T細(xì)胞的培養(yǎng)過程中加入適當(dāng)?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn)，并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化,。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗作為檢查機(jī)體細(xì)胞免疫的功能狀態(tài),。具體方法有形態(tài)學(xué)檢查法。
（一）操作方法
1． 于培養(yǎng)瓶內(nèi)加0.2ml馬血,，對照組與試驗組各做2瓶,，試驗組均加PHA 30?g；
2．37℃培養(yǎng)72h,，每天輕搖1~2次,；
3．取出培養(yǎng)瓶，搖散血,，倒入離心管,，3 000r/min離心10min，去上清液,；
4．用血球泥制備推片,，晾干,；
5．以瑞氏染液染2min~3min，加等量緩沖液,，混勻繼續(xù)染3min,，蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min,，餾水沖洗,，晾干；
6．鏡檢,，觀察,，計數(shù)。
（二）注意事項
1．培養(yǎng)液zui適pH為7.2~7.4,，過酸過堿都會影響細(xì)胞的生長而降低轉(zhuǎn)化率,。培養(yǎng)液的類型與動物的白細(xì)胞有關(guān)，如小鼠的淋轉(zhuǎn)試驗,，用RPMI-1640,，用199液則不成功。
2．培養(yǎng)時間 以72h~120h轉(zhuǎn)化率zui高,，超過這個時間,，則轉(zhuǎn)化率反而下降。
3．吞噬細(xì)胞有時在形態(tài)上易與“過渡型"混淆,。但巨噬細(xì)胞有其固有的特點,，核占細(xì)胞比較小且偏一邊，核染色質(zhì)濃集,，細(xì)胞漿呈藍(lán)灰色或紅褐色,，胞漿內(nèi)有大小不等的顆粒或吞噬物,，且含有大小不等的氣泡。
4．涂片要少蘸些細(xì)胞,，推出尾部來,，因淋巴細(xì)胞較大，易集中在尾部及邊緣,。
5．觀察淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,，染色不要太濃，以便觀察核仁,。
6．嚴(yán)格的無菌操作,，是干細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗成功的關(guān)鍵。
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干細(xì)胞