技術文章
原代細胞功能檢測方法
閱讀:698 發(fā)布時間:2018-5-22為了檢測原代細胞機體的免疫功能,,可以通過體外或體內實驗對參與免疫應答的不同細胞進行分離,、鑒定及功能測定,。用于上述免疫功能檢測的材料zui常用的是外周血,也可以是胸腺,、脾,、淋巴結及各種組織。
一,、免疫細胞的分離
體外測定免疫細胞的功能,,首先要從不同材料中分離所需細胞。根據細胞的表面標志,、理化性質及功能進行設計和選擇不同的分離方法,。
(一)外周血單個核細胞的分離
外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)包括淋巴細胞和單核細胞。PBMC是免疫學實驗zui常用的細胞,,也是進行T、B細胞分離純化過程的*步,。常用的分離方法是葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll-Urografin)密度梯度離心法,。
(二)淋巴細胞及其亞群的分離
淋巴細胞及其亞群的分離有多種方法,如玻璃黏附法,、尼龍毛分離法,、E花環(huán)形成分離法等。由于單克隆抗體的應用和免疫學技術的發(fā)展,,可通過以下方法進行分離,。
1.免疫吸附分離法 將已知抗淋巴細胞表面標志的抗體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板,加入淋巴細胞懸液,,表達相應細胞表面標志的淋巴細胞被貼附在培養(yǎng)板上,,可與細胞懸液中其他細胞分開。
2.磁珠分離法(immune magnetic bead, IMB) 近年來免疫磁珠法應用較廣泛,,是一種特異性分離所需淋巴細胞的方法,。
3.熒光激活原代細胞分離儀分離法(fluorescence activated cell sorting, FACS) FACS又稱流式細胞術(flow cytometry, FCM),是一種集光學,、流體力學,、電力學和計算機技術于一體,可對細胞進行多參數定量測定和綜合分析方法,。
磷酸化核纖層蛋白A/CIgG 人抗肝特異性脂蛋白(LSP)
磷酸化核因子2相關因子2IgG 人抗肝素PF4復合物/HIT(HIT)
磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑IgG 人抗肝腎微粒體(LKM)
磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑IgG 人抗肝膜(LMA)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗肝可溶性抗原(SLA)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗肝胞質1型(LC1)
磷酸化核因子κB激酶alpha抑制劑IgG 人抗鈣調素特異(CAM-ab)
磷酸化核因子κB激酶beta抑制劑IgG 人抗鈣蛋白酶抑素(ACAST-DⅣ)ELISA it
原代細胞