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詳細(xì)介紹
我司供應(yīng)的生化檢測(cè)試劑盒,，僅供科研使用。
| 產(chǎn)品名稱 | 測(cè)定方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 微量法,、可見(jiàn)分光光度法 | 100管/48樣,、50管/24樣 | YS-01J6321 |
商品介紹：
測(cè)定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧,，在合成ATP的同時(shí),，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+,。糖,、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成,。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱,。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài),。此外,，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值,；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、移液器、1 mL玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水,。
通用規(guī)則：
1,、洗液不夠時(shí),，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液,，加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
2,、液體全部加完后,，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能,。
3、底物有一定的毒性,，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸。
4,、檢測(cè)前,，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上,。
5,、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差,。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去,。
7,、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,，防止水分的蒸發(fā),。
8、洗板時(shí),，每次洗液加入后,，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*,。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
9,、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10,、底物是光敏感的,，要在臨用前現(xiàn)配。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則：
1,、洗液不夠時(shí),，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液,，加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
2,、液體全部加完后,，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能,。
3、底物有一定的毒性,，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸。
4,、檢測(cè)前,，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上,。
5,、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差,。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去,。
7,、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,，防止水分的蒸發(fā),。
8,、洗板時(shí)，每次洗液加入后,，應(yīng)靜置1分鐘,，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),，倒去液體后,，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干,。
9,、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確,。
10,、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配,。
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AT2R2 血管緊張素Ⅱ受體2抗體 科恩根霉
ASH1L ASH1蛋白抗體 華根霉
AADACL2 芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體 白腐菌
AAMP 血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移蛋白抗體 蕁麻青霉
AKR1B10 醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體 小刺青霉
AKR1C2 膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體 婁地青霉
ANGPTL3 血管生成素樣蛋白3抗體 產(chǎn)紫青霉
Acylglycerol Kinase 甘油酯激酶線粒體抗體 特異青霉
phospho-alpha Adducin(Ser726) 磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 淡紫青霉
ATG16L2 自噬體ATG16L2蛋白抗體 島青霉
ACPT 睪丸酸性磷酸酶抗體 灰黃青霉
Acid Phosphatase 酸性磷酸酶抗體 園弧青霉=桔灰青霉
AKIP 極光激酶A相互作用蛋白1抗體 頂青霉
APOL6 載脂蛋白樣蛋白6抗體 黃綠青霉
ARTS 凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體 產(chǎn)黃青霉
A2LD1 A2LD1蛋白抗體 阿達(dá)青霉
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒A4GNT α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體 擬青霉
AADAC 芳香乙酰胺脫乙酰基酶抗體 棉鈴蟲(chóng)擬青霉
AADACL4 芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體 玫煙色擬青霉
AASDHPPT 氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體 露濕漆斑菌
測(cè)定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,，不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱,。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起,。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中,。
4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求,。 如室溫高于20℃,，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察,，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵,。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色,。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度,、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法,。
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