詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序,;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間,;4.循環(huán)次數(shù),;5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理,;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),;8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Clostridium botulinum |
貨號(hào) | YSP96373 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATG隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補(bǔ),,特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),,以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),, 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì),。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)外觀包裝:25kg/袋可拆
真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)外觀包裝:25kg/袋可拆
植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)1ml(500X)外觀包裝:25kg/袋可拆
體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)外觀包裝:500g/桶 8桶/箱 可拆
細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:25袋/箱可拆
組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:500g/桶 8桶/箱可拆
體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:500g/桶 8桶/箱可拆
植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:25kg/袋可拆
單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性比色法篩選試劑盒外觀包裝:25kg/袋可拆
細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:25kg/袋可拆
組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:25kg/袋可拆
體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:暗褐粉狀
25KG/紙板桶可拆
植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(單線態(tài)氧氣)外觀包裝:淺黃液體
1KG/塑料瓶可拆
單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性熒光篩選試劑盒外觀包裝:25kg/袋可拆
細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化比色法測(cè)定試劑盒外觀包裝:1000g/袋 12袋/箱可拆
冰凍切片蛋白氧化免疫染色測(cè)定試劑盒外觀包裝:1000g/袋 12袋/箱可拆
肉毒梭狀芽孢桿菌C型外毒素基因PCR試劑盒磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 英文縮寫:Alpha B Crystallin
磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 英文縮寫:Alpha casein
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 英文縮寫:Alpha chimerin
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 英文縮寫:alpha COP I
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 英文縮寫:alpha Defensin 1
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 英文縮寫:Alpha Dystroglycan
磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體 英文縮寫:alpha Elastin
發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體 英文縮寫:alpha Estradiol
磷酸化發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體 英文縮寫:alpha Internexin
蛋白激酶B3 英文縮寫:alpha Lactalbumin