詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎(chǔ)程序,;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間,;4.循環(huán)次數(shù),;5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理,;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué),;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因元件tg7探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Fluorescent quantitative PCR kit with TG7 probe |
貨號 | YSP96379 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴增長至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATG隨機分布,,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補,,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會,。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位),;在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌,。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無放射性污染、易推廣,。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
脂質(zhì)過氧化物亞油酸(linoleic acid)ELISA定量測定試劑盒6次/盒外觀包裝:棕色粉狀
25KG/紙板桶可拆
脂質(zhì)過氧化物亞油酸(linoleic acid)高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒3×1ml外觀包裝:桔黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
細(xì)胞硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒100ml外觀包裝:微黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
組織硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:白色粉狀
1KG/鋁箔袋可拆
血液硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:棕黃粉狀
5G/鋁箔袋可拆
體液硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒3×1ml外觀包裝:淡黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化(羰基化;carbonyl)比色法測定試劑盒1ml(500X)外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
組織內(nèi)蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)比色法測定試劑盒1ml(500X)外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
血液蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)比色法測定試劑盒6次/盒外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
體液蛋白氧化(羰基化;carbonyl)比色法測定試劑盒100ml外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
純化線粒體蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)比色法測定試劑盒6次/盒外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
植物蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)比色法測定試劑盒3×1ml外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
冰凍切片蛋白氧化(羰基化;carbonyl)免疫染色測定試劑盒500 ml外觀包裝:白色顆粒
25KG/復(fù)合編織袋可拆
細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)熒光檢測試劑盒100ml外觀包裝:白色顆粒
25KG/紙板桶可拆
組織內(nèi)蛋白氧化(羰基化,;carbonyl)熒光檢測試劑盒6次/盒外觀包裝:黃棕粉狀
25KG/紙板桶可拆
血液蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒3×1ml外觀包裝:淡黃液體
25KG/塑料桶可拆
轉(zhuǎn)基因元件tg7探針法熒光定量PCR試劑盒艾滋病病毒復(fù)制結(jié)合蛋白抗體 英文縮寫:AMSH
AFP4b蛋白抗體 英文縮寫:AMY2A
HIV-1病毒復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體 英文縮寫:Amylin
伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體 英文縮寫:Amylin
心肌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域1抗體 英文縮寫:Amylin(1-37) amide
抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 英文縮寫:Amylin1-37/FITC
抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 英文縮寫:Amyloid Beta 25-35/Beta-Amyloid 25-35
抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 英文縮寫:Amyloid Precursor Protein
抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 英文縮寫:Amyloid Precursor Protein
雌二醇抗體 英文縮寫:Amyloid Precursor Protein