詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎程序,;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間,;4.循環(huán)次數(shù),;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理,;7.PCR的反應動力學,;8.PCR擴增產(chǎn)物,;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米MON832探針法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | QPCR kit for probe method of transgenic maize mon832 |
貨號 | YSP96626 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,,一般在2~4 小時完成擴增反應,。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,。可直接用臨床標本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細胞,、活PCR技術概論。
細胞鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CALCINEURIN,;PP2B)活性定磷比色法定量檢測試劑盒500 ml外觀包裝:9kg/袋不可拆
組織鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CALCINEURIN,;PP2B)活性定磷比色法定量檢測試劑盒6次/盒外觀包裝:9kg/袋不可拆
細胞蛋白磷酸酶2A( PP2A)活性比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:100ml/瓶可拆
組織蛋白磷酸酶2A (PP2A)活性比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:900克/袋不可拆
細胞鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CALCINEURIN;PP2B)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒3×1ml外觀包裝:1KG/袋可拆
組織鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CALCINEURIN,;PP2B)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒6次/盒外觀包裝:10支/盒可拆
細胞蛋白磷酸酶2A( PP2A)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:500g/袋可拆
組織蛋白磷酸酶2A (PP2A)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒100ml外觀包裝:100g/袋,10袋/件可拆
細胞鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒外觀包裝:100g/袋 可拆
組織鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒6次/盒外觀包裝:100g/袋可拆
植物鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒外觀包裝:10支/盒可拆
鈣調(diào)蛋白結(jié)合檢測試劑盒篩選外觀包裝:10支/盒可拆
細胞蛋白磷酸酶1(PP1)活性比色法定量檢測試劑盒外觀包裝:10支/盒可拆
組織蛋白磷酸酶1(PP1)活性比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:10支/盒可拆
細胞絡氨酸磷酸酶(TP)活性比色法定量檢測試劑盒1ml(500X)外觀包裝:10支/盒可拆
組織絡氨酸磷酸酶(TP)活性比色法定量檢測試劑盒500 ml外觀包裝:100g/袋×10袋/盒×6盒/件可拆
轉(zhuǎn)基因品系玉米MON832探針法qPCR試劑盒胱氨酸抗體 英文縮寫:CK3
胰凝乳蛋白酶B抗體 英文縮寫:CK4
補體C1q腫瘤壞死因子相關蛋白2抗體 英文縮寫:CK42
細胞分化促進因子77抗體 英文縮寫:CK5(Cytokeratin 5)
半胱氨酸蛋白酶抑制劑樣蛋白1抗體 英文縮寫:CK5+6
CTBS蛋白抗體 英文縮寫:CK6
硫酸軟骨素β1/β-1,4-GalNAc-T抗體 英文縮寫:CK7
硫酸軟骨素聚合酶3抗體 英文縮寫:CK7
胎盤催乳素1/2抗體 英文縮寫:CK7
酪氨酸激酶C-SRC抗體 英文縮寫:CK7(Cytokeratin 7)human
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴增長至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,,否則會形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會。