詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序,;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度,;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù),;5.PCR 反應(yīng)液的配制,;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),;8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系棉花T304-40染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | QPCR of transgenic cotton strain t304-40 by dye method |
貨號(hào) | YSP96684 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶,、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度,。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),,特別是3'端的互補(bǔ),,否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),,以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),, 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì),。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,;在病毒的檢測(cè)中,,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,,無放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
Goat Antirabbit IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaAmyloid (3135
Goat Antirabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaAmyloid 142 CT β淀粉樣肽 142 (C端多肽
Goat Antirabbit IgG/PECY5 PECY5標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlbetaAmyloid(116
Goat Antirabbit IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaAmyloid(116
Goat Antirabbit IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaAmyloid(128
Goat Antirabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaAmyloid(140
Goat Antirabbit IgG/PECy3 PECy3標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetaarrestin 1/2(betaarrestin 1/2
Goat Antirabbit IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗兔IgG 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1mlBetacasein( Betacasein
Dystrophin Associated Glycoprotein 1英文簡稱CLPTM1L鋅指蛋白185 檢測(cè)范圍:1253nmol/L24ng/ml
utrophin英文簡稱DEFα1鋅結(jié)合醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白2 檢測(cè)范圍:1254nmol/L
matrilysin英文簡稱MBL2鋅指蛋白909 檢測(cè)范圍:1255nmol/L10ng/ml
Stromelysin2英文簡稱NUSγ基丁A受體相關(guān)膜蛋白3 檢測(cè)范圍:1256nmol/L8ng/mL
Kallikrein 10英文簡稱RTN4鋅指蛋白288 檢測(cè)范圍:1257nmol/L20ng/ml
Kallikrein 11英文簡稱RTN4B鋅指蛋白ZBTB38 檢測(cè)范圍:1258nmol/L
Kallikrein 2英文簡稱MFSD2A鋅指蛋白693 檢測(cè)范圍:1259nmol/L400pg/ml
Kallikrein 6英文簡稱NDUFB4鋅指蛋白ZBTB12 檢測(cè)范圍:1260nmol/L200ng/ml
Kininogen英文簡稱NDUFB8鋅指蛋白924 檢測(cè)范圍:1261nmol/L10ng/ml
Kininogen 1英文簡稱pPPARγ鋅指蛋白297 檢測(cè)范圍:1262nmol/L200IU/ml
colonystimulating factor英文簡稱pPPARγ AbNFκB激活蛋白205 檢測(cè)范圍:1263nmol/L200pg/ml
Hexokinase II英文簡稱DEFα2鋅指蛋白23 檢測(cè)范圍:1264nmol/L
methylmalonic acid英文簡稱DEFα3鋅指蛋白146 檢測(cè)范圍:1265nmol/L20ng/ml
Thyroid stimulating antibody英文簡稱APCR乳腺癌相關(guān)基因2(鋅指蛋白364) 檢測(cè)范圍:1266nmol/L100ng/ml
thyroid hormone receptor interactor 6英文簡稱GALNT7細(xì)胞周期蛋白1結(jié)合蛋白 檢測(cè)范圍:1267nmol/L400pg/ml
轉(zhuǎn)基因品系棉花T304-40染料法qPCR試劑盒DIM-7蛋白抗體 英文縮寫:Cyp2-j3
核糖核酸酶Dicer抗體 英文縮寫:CYP2R1
內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 英文縮寫:CYP2S1
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族2抗體 英文縮寫:CYP2W1
DNA連接酶1抗體 英文縮寫:CYP39A1
DHH蛋白抗體 英文縮寫:CYP3A1
D型多巴色素脫羧酶 英文縮寫:CYP3A4
DNA聚合酶α抗體 英文縮寫:CYP3A4
MREG蛋白抗體 英文縮寫:CYP3A4(Cytochrome p450 3A4)
RAS相關(guān)抑細(xì)胞生長蛋白1抗體 英文縮寫:CYP450