產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 說(shuō)明書 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
英文名稱 | Recombinant Proteasome subunit beta type-9 (P | 物種 | Homo sapiens (Human,,人) |
來(lái)源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
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更新時(shí)間:2023-03-31 09:52:13瀏覽次數(shù):291
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
英文名稱 | Recombinant Proteasome subunit beta type-9 (P | 物種 | Homo sapiens (Human,,人) |
來(lái)源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
相關(guān)產(chǎn)品:
Thimet脫寡肽酶1(THOP1)重組蛋白 物種,; Homo sapiens (Human,人) 來(lái)源,; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉
轉(zhuǎn)酮醇酶樣蛋白1(TKTL1)重組蛋白 物種,; Homo sapiens (Human,人) 來(lái)源,; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉
丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白 物種,; Mus musculus (Mouse,小鼠) 來(lái)源,; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉
僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來(lái)源 |
多功能肽酶2(PSMB9)重組蛋白 | Homo sapiens (Human,,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱:Recombinant Proteasome subunit beta type-9 (PSMB9)
LMP2; Proteasome(Prosome,Macropain)Subunit Beta Type 9; Macropain chain 7; Multicatalytic endopeptidase complex chain 7; Really interesting new gene 12 protein; Large Multifunctional Peptidase 2
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人)
來(lái)源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位::n/a
預(yù)測(cè)分子量:24.7kDa
實(shí)際分子量:-(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)
片段與標(biāo)簽:Thr22~Asp218 with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):-
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易,;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽,;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá),。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測(cè)和鑒定
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達(dá)蛋白的分析,、純化、檢測(cè)
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,,表達(dá)蛋白的分析,、純化,、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問(wèn)題,。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1,、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,,然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片,。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當(dāng)減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解,。
2,、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定,、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作,。
肝胰腺壞死性細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Necrotizing Hepatopancreatitis BacteriumPCR
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副結(jié)核分支桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Mycobacterium paratuberculosisPCR
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大鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-22 ELISA Kit
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鴨腸炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Duck Enteritis VirusPCR
鴨肝炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Duck Hepatitis Virus(DHV)PCR
鴨肝炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Duck Hepatitis Virus 3(DHV3)3RTPCR
注意事項(xiàng):
1,、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間,。
2、雖然作用溫和,,但能硬化組織,,固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎,。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò) 24 小時(shí),。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,,影響免疫組化結(jié)果。因此,,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),,有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。
4,、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。
5、為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作