詳細介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
產品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎程序,;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間,;4.循環(huán)次數,;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理,;7.PCR的反應動力學,;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件,。
產品名稱 | 轉基因品系小麥MON71800 PCR試劑盒 |
英文名稱 | PCR kit for transgenic wheat mon71800 |
貨號 | YSP96776 |
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份反應五要素:
產品僅用于科研參加PCR反應的物質主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶,。ATG隨機分布,,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,,避免兩條引物間互補,,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,,產生非特異的擴增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,,應嚴格要求配對,,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會,。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合,;
②堿基配對原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結合是關鍵,。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應,。擴增產物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術概論,。
表皮調節(jié)素(EREG)(學發(fā)光免疫分析法)Asarylaldehyde純度:≥98%
表皮調節(jié)素(EREG)(學發(fā)光免疫分析法)Curculigoside純度:≥98%
博來水解酶(BLMH)(學發(fā)光免疫分析法)Abrine純度:≥98%
補體1抑制因子(C1INH)(學發(fā)光免疫分析法)Vanillic acid純度:≥98%
補體3a(C3a)(學發(fā)光免疫分析法)Vanillin純度:≥98%
補體C3轉酶(C3c)(學發(fā)光免疫分析法)Diosmetin純度:≥98%
補體成分1q子成分C(C1qC)(學發(fā)光免疫分析法)Cinchonidine純度:≥98%
ERK1/2(p44/42 MAPK) 絲裂原活蛋白激酶1/2 * 0.1ml Gentiopicroside
phosphoERK1/2(Thr202/Tyr204)( p44/42 MAPK) 絲裂原活蛋白激酶1/2 * 0.2ml Aloin
phosphoERK1(Thr202/Tyr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 絲裂原活蛋白激酶1/2 * 0.1ml Aloin
phosphoERK1(Thr197/Thr202) 絲裂原活蛋白激酶1/2 * 0.1ml Aloenin
phosphoMAPK3(Tyr204) 絲裂原活蛋白激酶3 * 0.1ml Gramine
EphB2/Eph receptor B2 酪蛋白激酶受體B2 * 0.1ml Ruscogenin
EPHB4 酪蛋白激酶受體B4 * 0.1ml Chlorogenic acid
ST14/MTSP1 絲蛋白酶14/膜型絲蛋白酶1 * 0.2ml Chlorogenic acid
轉基因品系小麥MON71800 PCR試劑盒范可尼貧血組蛋白A抗體 英文縮寫:Factor XII light chain
卷曲蛋白3抗體 英文縮寫:factor XIII
細胞分裂周期樣蛋白20抗體 英文縮寫:FAD24
鐵氧化還原蛋白還原酶抗體 英文縮寫:FADD
磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 英文縮寫:FADD (Fas-associated protein with death domain)
甲精結合蛋白17抗體 英文縮寫:FADS1
泛素樣核糖體蛋白S30/MNSF-β抗體 英文縮寫:FADS1
F-box蛋白2抗體 英文縮寫:FADS2
F-box蛋白45抗體 英文縮寫:FAF1
法尼基二磷酸合酶抗體 英文縮寫:FAHD1