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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱(chēng) | Recombinant Nei Endonuclease VIII Like Protei | 物種 | Homo sapiens (Human，人) |
| 來(lái)源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！
產(chǎn)品名稱(chēng)：Nei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)重組蛋白
英文名稱(chēng)：Recombinant Nei Endonuclease VIII Like Protein 1 (NEIL1)
NEI1; hFPG1; FPG1; DNA-(apurinic or apyrimidinic site) lyase Neil1; Nei-like protein 1; DNA glycosylase/AP lyase Neil1
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human,，人) 來(lái)源：原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定) 亞細(xì)胞定位：：分泌 預(yù)測(cè)分子量：34.6kDa 實(shí)際分子量：35kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)) 片段與標(biāo)簽：Ser43~Ala314 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl, pH8.0, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性狀：凍干粉 純度：> 95% 等電點(diǎn)：10.3 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明,。
2,、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉,，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3,、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分。
4,、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點(diǎn),、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。
5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況,。
相關(guān)產(chǎn)品：
肝素酶(HPSE)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源,； 蛋白偶聯(lián) 性狀：凍干粉
肌酸激酶B(CK-BB)天然蛋白 物種,； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來(lái)源,； 天然提取 性狀：凍干粉
羧酸酯酶5A(CES5A)活性蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源,； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
蛋白表達(dá)及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。
3.通過(guò)親和，離子交換,，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。
4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過(guò)程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶(hù)在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題,。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過(guò)濾后的無(wú)菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃,。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來(lái)保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性,。
(3)類(lèi)固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑,。在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類(lèi),多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑,。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑,。
小隱孢子蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Cryptosporidium parvumPCR
細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Parvovirus B19(PVB19B19 PCR
文氏密PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Treponema vincentiiPCR
豚鼠耳炎諾卡菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Nocardia otitidiscaviarumPCR
大鼠組蛋白脫乙酰基酶1(HDAC1)ELISA試劑盒 ,，英文名： HDAC1 ELISA Kit
Mouse ai thyroid peroxidase aibody (TPO-Ab) ELISA Kit 小鼠抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒
MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanmacrophagestimulatingprotein,MSPELISAKit人巨噬細(xì)胞刺激蛋白規(guī)格：48T/96T
土壤α活性EPS-G7酶偶聯(lián)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitACA-IgG大鼠抗心0脂抗體IgG規(guī)格：48T/96T
Nei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)重組蛋白鵪鶉奇異線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Cyrnea coliniPCR
奧爾帕瓦約病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Allpaahuayo virus(ALLV)RTPCR
奧爾森派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Perkinsus olseniPCR
奧利華斯病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Oliveros virus(OLVV)RTPCR
操作步驟：
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL～1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺(tái)上,，溫和振蕩15 min,；
6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
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