酪氨酰DNA磷酸二酯酶1(TDP1)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：葡萄糖激酶(GCK)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 Toll樣受體4(TLR4)重組蛋白 物種； Capra hircus; Caprine (Goat,，山羊) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Hu

公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：酪氨酰DNA磷酸二酯酶1(TDP1)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Tyrosyl DNA Phosphodiesterase 1 (TDP1)

SCAN1; Tyr-DNA phosphodiesterase 1

酶與激酶

 

樣品要求：

1,、待標記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明,。

2,、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉,，如果是液體，濃度應大于1mg/ml,。

3,、抗體IgG樣品中應不含BSA、疊氮鈉成分,。

4,、大分子蛋白應提供分子量、等電點,、緩沖液成分及pH等信息,；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5,、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況,。
相關(guān)產(chǎn)品：

γ-谷氨酰水解酶(gGH)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉

亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human,，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移酶2(MOGAT2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human,，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用,。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經(jīng)常遇到的問題,。

(1)原核細胞表達的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑,。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。

查菲埃立克體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ehrlichia chaffeensisPCR 50T

產(chǎn)堿普羅威登斯菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Providencia alcalifaciensPCR 50T

產(chǎn)色葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus chromogenesPCR 50T

腸出血性大腸桿菌血清型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)O157PCR 50T

TM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CACH2/CaV1.2 L型鈣通道蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Pdk4 酸脫氫酶4抗體 規(guī)格 0.1ml

Calcitonin (CT)降鈣素 濃縮液 0.1ml 進口分裝

Tenascin C 英文名稱： 細胞粘合素(固生蛋白)抗體 0.1ml

CENPA 英文名稱： 著絲粒蛋白A 0.1ml

Anti-CACH2/CaV1.2 L型鈣通道蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

酪氨酰DNA磷酸二酯酶1(TDP1)重組蛋白草魚呼腸孤病毒型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Grass Carp Reovirus(GCRV)3RTPCR

蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium xenopiPCR

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium perfringensPCR

產(chǎn)酸克雷伯菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Klebsiella oxytocaPCR

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融