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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱(chēng) | Recombinant Exostoses 2 (EXT2) | 物種 | Homo sapiens (Human,，人) |
| 來(lái)源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！
產(chǎn)品名稱(chēng)：外生骨疣蛋白2(EXT2)重組蛋白
英文名稱(chēng)：Recombinant Exostoses 2 (EXT2)
SOTV; Multiple exostoses protein 2; Glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-proteoglycan/N-acetylglucosaminyl-proteoglycan 4-alpha-N-acetylglucosaminyltransferase
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human,，人) 來(lái)源：原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定) 亞細(xì)胞定位：：高爾基體, 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔 預(yù)測(cè)分子量：27.2kDa 實(shí)際分子量：30kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)) 片段與標(biāo)簽：Pro47~Phe253 with N-terminal His Tag 緩沖液成份：PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性狀：凍干粉 純度：> 95% 等電點(diǎn)：5.6 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明,。
2,、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉,，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3,、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分,。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點(diǎn),、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。
5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況,。
相關(guān)產(chǎn)品：
乳酸脫氫酶A(LDHA)重組蛋白 物種,； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來(lái)源,； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
Nei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源,； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
高溫需求因子A1(HTRA1)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源,； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
蛋白表達(dá)及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。
3.通過(guò)親和，離子交換,，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。
4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過(guò)程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶(hù)在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題,。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過(guò)濾后的無(wú)菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來(lái)保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類(lèi)固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑,。在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類(lèi),多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑,。
獸類(lèi)嗜衣原體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Chlamydophila pecorumPCR 50T
嗜吞噬細(xì)胞無(wú)漿體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Anaplasma phagocytophilumPCR 50T
飾紋汀蛙虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Boheliridovirus(BIV)PCR 50T
施氏油脂線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Elaeophora schneideriPCR 50T
PTN(Human pleiotrophin) ELISA Kit 人多效生長(zhǎng)因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-GAD65 谷脫羧酶-65抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit 人α1β糖蛋白 96T
sp-selectin 英文名稱(chēng)： 可溶性P選擇素抗體 0.1ml
CELSR2 英文名稱(chēng)： 表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白2抗體 0.1ml
Anti-GAD65 谷脫羧酶-65抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
外生骨疣蛋白2(EXT2)重組蛋白消化鏈球菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Peptostreptococcus spp.PCR
小蛇菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Serpulina spp.PCR
小雙節(jié)病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Picobirnavirus(PBV)RNARTPCR
辛諾柏病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Sin Nombre Virus(SNV)RTPCR
操作步驟：
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL～1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺(tái)上,，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
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