糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：腸堿性磷酸酶(ALPI)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human,，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 半乳糖苷酶β(GLb)重組蛋白 物種； Bos taurus; Bovine (Cattle,，牛) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 甘露糖磷酸異構(gòu)酶(MPI)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human,，人) 來源

樣品要求：

1,、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分，請?zhí)崆皹?biāo)注說明,。

2,、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉,，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml,。

3,、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分,。

4,、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點,、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)

GPMM; Phosphorylase,Glycogen; McArdle Syndrome,Glycogen Storage Disease Type V; Myophosphorylase

酶與激酶 代謝通路 內(nèi)分泌學(xué)

 

相關(guān)產(chǎn)品：

三素修復(fù)核酸外切酶2(TREX2)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 谷氨酰tRNA合成酶2(EARS2)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題,。

(1)原核細(xì)胞表達的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細(xì)胞表達的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進行,如哺乳動物細(xì)胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑,。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

奧斯特線蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ostertagia spp.PCR 50T

巴氏阿米巴原蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Balamuthia mandrillarisPCR 50T

巴西諾卡菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Nocardia brasiliensisPCR 50T

白水河病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Whitewater Arroyo virus(WWAV)RTPCR 50T

phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide 0酸化氨基末端1/2/3(pJNK1/2/3)抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-AF6/Afadin 絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Caspase-9 (Tyr153) 0酸化半胱9抗體 規(guī)格 0.1ml

大鼠血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清

VDCC-L alpha 英文名稱： L-型電壓依賴型鈣通道α抗體 0.1ml

DNA Polymerase gamma 英文名稱： DNA聚合酶γ/DNA pol γ抗體 0.2ml

Anti-AF6/Afadin 絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白耶爾森菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Yersinia spp.PCR

恙蟲病東方體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Orientia tsutsugamushiPCR

癢螨通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Psoroptes spp. PCR

洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Burkholderia cepaciaPCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和,，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。