溶酶體酸脂肪酶A(LIPA)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：鞘磷脂磷酸二酯酶3(SMPD3)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 鞘磷脂磷酸二酯酶4(SMPD4)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 羧肽酶A5(CPA5)重組蛋白 物種,； Homo sapiens (Human，人) 來

樣品要求：

1,、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分,，請?zhí)崆皹?biāo)注說明,。

2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg,，最好是干粉,，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml,。

3,、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分,。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點,、緩沖液成分及pH等信息,；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。

5,、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床,！

產(chǎn)品名稱：溶酶體酸脂肪酶A(LIPA)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Lipase A, Lysosomal Acid (LIPA)

LAL; CESD; Lipase A,Lysosomal Acid,Cholesterol Esterase(Wolman Disease); Acid Cholesteryl Ester Hydrolase; Lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase

酶與激酶

 

相關(guān)產(chǎn)品：

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特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題,。

(1)原核細胞表達的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑,。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

米黑根毛霉PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Rhizomucor mieheiPCR

曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Mannheimia spp.PCRPCR

馬鏈球菌馬亞種PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Streptococcus equi subspecies equiPCR

麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Mycobacterium lepraePCR

大鼠巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒 ,，英文名： MCSF ELISA Kit

Mouse lipoprotein associated phospholipase A2 (Lp-PL-A2) ELISA Kit 小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒

Rat8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit 大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFN(HumanFibronectin)ELISAKit人纖連蛋白規(guī)格：48T/96T

細胞肌酸同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

Ratperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

溶酶體酸脂肪酶A(LIPA)重組蛋白平尾毛細線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Capillaria caudinflataPCR

破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium tetaniPCR

葡萄孢菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Botrytis cinerea PCR

葡萄球菌屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus spp.PCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。