蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：肌肽合酶1(CARNS1)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse,，小鼠) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 核酸外切酶1(EXO1)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human,，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 拓撲異構(gòu)酶Ⅱβ(TOP2b)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse,，小鼠)

樣品要求：

1、待標記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分,，請?zhí)崆皹俗⒄f明。

2,、待標記樣品最小標記量為1mg,，最好是干粉，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml,。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分,。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點,、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Threonyl tRNA Synthetase (TARS)

ThrRS; PL-7; PL7; Threonine tRNA Ligase 1,Cytoplasmic

酶與激酶

 

相關(guān)產(chǎn)品：

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)真核蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat,，大鼠) 來源,； 真核表達 性狀：凍干粉 乙醛氧化酶1(AOX1)重組蛋白 物種； Bos taurus; Bovine (Cattle,，牛) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉 細胞色素P450家族成員4F2(CYP4F2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human,，人) 來源,； 原核表達 性狀：凍干粉

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用,。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題,。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃,。

(2)真核細胞表達的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑,。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

致病性大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pathogenic E.coliPCR 50T

豬等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Isospora suisPCR 50T

豬皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porcine herpesvirusPCR 50T

轉(zhuǎn)輪蟹通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ixoides spp.PCR 50T

Oxytoxin 小鼠催產(chǎn)素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FAST kinase Fas活化的絲/抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/APC APC標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

ASP(Human antibody to group A streptococcal polysaccharide) ELISA Kit 人A組鏈球菌菌壁多糖抗體 96T

STAP2 英文名稱： 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)接頭蛋白2抗體 0.1ml

Cadherin 8 英文名稱： 鈣粘附蛋白8抗體 0.2ml

Anti-FAST kinase Fas活化的絲/抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)重組蛋白人膚蠅PCR檢測試劑盒 英文名稱; Dermatobia hominisPCR

人分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium hominisPCR

人鼻病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Human Rhinovirus PCR

人鼻病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Human Rhinovirus 9 9 PCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。