蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：B2M重組小鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
白介素4(IL4)重組蛋白 Recombinant Interleukin 4 (IL4)
DCXR重組人 DCXR / HCR2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
A2M Protein Human 重組人 A2M /

公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床,！

產(chǎn)品名稱：蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Protein Disulfide Isomerase A5 (PDIA5)

PDI-A5; PDIR; Protein Disulfide Isomerase-Associated 5; Protein disulfide isomerase-related protein

酶與激酶

 

樣品要求：

1,、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分,，請?zhí)崆皹?biāo)注說明。

2,、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg,，最好是干粉，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml,。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分,。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點(diǎn),、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況,。
相關(guān)產(chǎn)品：

白介素4(IL4)重組蛋白 Recombinant Interleukin 4 (IL4)

A2M Protein Human 重組人 A2M / CPAMD5 / Alpha-2-macroglobulin 蛋白 (His 標(biāo)簽)

B2M重組小鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL6ST Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL6ST / gp130 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DCXR重組人 DCXR / HCR2 蛋白 (Hi

蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮档偷鞍椎男в?。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃,。

(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動物細(xì)胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑,。

詹姆士城峽谷病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Jamestown Canyon Virus (JCV）RTPCR 50T

中華枝睪吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clonorchis sinensisPCR 50T

豬滑液支原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycoplasma hyosynoviaePCR 50T

豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲株PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus North America

Oct-4 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CD46/MCP 膜輔蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh p53 (FL-393) 抑制基因p53抗體 規(guī)格 0.2ml

ENG Kit Mouse 小鼠 Endoglin / CD105 / ENG ELISA配對抗體 ELISA

TMEM147 英文名稱： 跨膜蛋白147抗體 0.2ml

Cyclin J 英文名稱： 周期素J抗體 0.2ml

Anti-CD46/MCP 膜輔蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)重組蛋白侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Aphanomyces invadansPCR

侵肺巴斯德菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pasteurella pneunotropicaPCR

茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Fusarium solaniPCR

腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Eurytrema coelomaticumPCR

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融