原卟啉原氧化酶(PPOX)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品：CD4重組大鼠 CD4 蛋白 (His 標簽) Protein
Connexin-45(CX45 0.5mgConnexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原)
ULBP2重組人 ULBP2 / N2DL-2 蛋白 (Fc 標簽) Protein
ADSL Protein Human 重組人 ADSL / Adenylosuccinat

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。

產(chǎn)品名稱：原卟啉原氧化酶(PPOX)重組蛋白

 英文名稱：Recombinant Protoporphyrinogen Oxidase (PPOX)

VP; PPO; V290M; Variegate Porphyria

酶與激酶

 

相關產(chǎn)品：

Connexin-45(CX45 0.5mgConnexin-45(CX45) 間隙連接蛋白45(抗原)

ADSL Protein Human 重組人 ADSL / Adenylosuccinate Lyase 蛋白 (His 標簽)

CD4重組大鼠 CD4 蛋白 (His 標簽) Protein

FCGR1 Protein Mouse 重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His 標簽)

ULBP2重組人 ULBP2 / N2DL-2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

樣品要求：

1,、待標記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分，如有特殊成分,，請?zhí)崆皹俗⒄f明,。

2、待標記樣品最小標記量為1mg,，最好是干粉,，如果是液體，濃度應大于1mg/ml,。

3,、抗體IgG樣品中應不含BSA、疊氮鈉成分,。

4,、大分子蛋白應提供分子量、等電點,、緩沖液成分及pH等信息,；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式,。

5,、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用,。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細胞表達的重組蛋白,。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃,。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性,。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性,。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等,。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑,。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融

公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床,！

線頸線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Nematodirus filicollisPCR 50T

細粒棘球絳蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Echinococcus granulosusPCR 50T

西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Nosema apisPCR 50T

無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Achromobacter spp.PCR 50T

NKA(Neurokinin A) 神經(jīng)激肽A抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-ATP1A1(Tyr10) 0酸化ATP酶蛋白a1抗體 規(guī)格 0.1ml

山羊抗兔 IgG(H+L)/AP 0.1ml 美國Jackson公司分裝

V5 tag 英文名稱： V5 tag標簽抗體 0.1ml

DKC1 英文名稱： 核仁蛋白NAP57抗體 0.2ml

Anti-APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

原卟啉原氧化酶(PPOX)重組蛋白貓支原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycoplasma felisPCR

貓血支原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycoplasma haemofelisPCR

貓嗜衣原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Chlamydophila felisPCR

貓庖疹病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Feline Herpes VirusPCR