標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá),。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
芳基硫酸酯酶B(ARSB)重組蛋白 | Homo sapiens (Human,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱:Recombinant Arylsulfatase B (ARSB)
ASB; G4S; N-acetylgalactosamine-4-sulfatase
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
來源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位::溶酶體
預(yù)測分子量:55.2kDa
實(shí)際分子量:55kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Leu81~Met533 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點(diǎn):7.7
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
相關(guān)產(chǎn)品:
雄激素受體(AR)重組蛋白 Recombinant Androgen Receptor (AR)
AGT Protein Human 重組人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT 蛋白 (His 標(biāo)簽)
VCAM1重組人 VCAM-1 / CD106 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 367-606, Fc
![1.png 1.png](https://img64.chem17.com/1cba7c2130d463f01b1a00885169153f37857f2e88976f05a4e8bf215c90e24311b3e38cef1a5c0e.png)
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析,、純化,、檢測
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析,、純化,、檢測應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題,。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1,、樣品前處理:
a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。
b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,,直至充分裂解。
2,、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定,、SDS-PAGE,、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
犬副流感病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Canine Parainfluenza Virus(CPIV)RTPCR 50T
球孢子菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Coccidioidesspp.PCR 50T
禽致病性大腸桿菌血清型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) O1PCR 50T
禽戊型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Avian Hepatitis E Virus(aHEV)RTPCR 50T
NF-H(Neurofilament triplet H) 高分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD40L CD40L抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh p70 S6 kinase beta 核糖體蛋白S61抗體 規(guī)格 0.2ml
EGFR Kit Human 人 EGFR / HER1 / ErbB1 ELISA配對抗體 ELISA
TREM1 英文名稱: 髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1抗體 0.2ml
C9orf89 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框89抗體 0.2ml
Anti-CD40L CD40L抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
芳基硫酸酯酶B(ARSB)重組蛋白馬鼻疽桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Malleomyces malleiPCR
馬鼻肺炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)PCR
馬巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Babesia equiPCR
麻風(fēng)分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium lepraePCR
注意事項(xiàng):
1,、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。
2,、雖然作用溫和,,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,,切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果,。因此,,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),,然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4,、本產(chǎn)品對人體有害,,操作時請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。
5,、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作