僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
賴氨酰氧化酶(LOX)活性蛋白 | Homo sapiens (Human,,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱:Active Lysyl Oxidase (LOX)
Protein-Lysine 6-Oxidase
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點(diǎn):6.2
應(yīng)用:Cell culture; Activity Assays.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易,;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽,;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá),。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測(cè)和鑒定
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達(dá)蛋白的分析,、純化、檢測(cè)
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,,表達(dá)蛋白的分析,、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),,按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題,。

注意事項(xiàng):
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間,。
2、雖然作用溫和,,但能硬化組織,,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎,。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí),。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,,影響免疫組化結(jié)果。因此,,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),,有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。
4,、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。
5,、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
相關(guān)產(chǎn)品:
CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase 0.5mgCNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型尿肽抗原
ANXA5 Protein Human 重組人 ANXA5 / Annexin Ⅴ / Annexin A5 蛋白
ACVRL1重組小鼠 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
IL13RA2 Protein M
操作步驟 :
根據(jù)使用量,,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加),。
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,,用 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,,用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,,然后再裂解,。
c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片,。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當(dāng)減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解,。
2,、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定,、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作,。
節(jié)菱孢霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Arthrinium spp.PCR 50T
解沒食子酸鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Streptococcus gallolyticusPCR 50T
錦鯉皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Koi Herpesvirus(KHV)PCR 50T
巨細(xì)胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Cytomegalovirus(CMV)PCR 50T
MKK3(MAP Kinase Kinase 3) 原活化蛋白MKK3/6抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ASIC1/BNaC2 酸敏感離子通道1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-AQP2(Ser264/261) 0酸化水通道蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
Thyroglobulin 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
DHRS4 英文名稱: 短鏈脫氫酶/還原酶家族4抗體 0.2ml
Anti-ASIC1/BNaC2 酸敏感離子通道1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
賴氨酰氧化酶(LOX)活性蛋白哈扎拉病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Hazara VirusRTPCR
哈維氏弧菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Vibrio harveyiPCR
哈特帕克病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Hart Park VirusRTPCR
哈達(dá)爾沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Salmonella hadarPCR