標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽,;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析,。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
羧酸酯酶3(CES3)活性蛋白 | Homo sapiens (Human,,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱:Active Carboxylesterase 3 (CES3)
Br3; ES31; Brain carboxylesterase 3; Esterase 31; Liver carboxylesterase 31 homolog
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:7.8
應(yīng)用:Cell culture; Activity Assays.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
相關(guān)產(chǎn)品:
Melamine/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記三聚胺 0.5mlMelamine/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記三聚胺
ARL2BP Protein Human 重組人 ARL2BP / BART1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL1R2重組食蟹猴 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CDCP1 Protein Mouse 重組小鼠 CDCP1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
S100A10重組人 S100A10 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
![1.png 1.png](https://img64.chem17.com/1cba7c2130d463f01b1a00885169153f37857f2e88976f05a4e8bf215c90e24311b3e38cef1a5c0e.png)
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達(dá)蛋白的分析,、純化、檢測
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,,表達(dá)蛋白的分析,、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng),,按一般的實驗步驟做沒太大的問題,。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1,、樣品前處理:
a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。
b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解,。
c)對于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片,。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,,直至充分裂解,。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE,、Western blotting 和免疫沉淀等操作,。
三叉奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Ostertagia trifurcataPCR 50T
瑟氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Theileria sergentiPCR 50T
山羊分枝桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Mycobacterium capricolumPCR 50T
扇革蜱通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Rhipicentor spp.PCR 50T
MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 層粘連蛋白受體1抗原(C端)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-Bim(Ser87) 0酸化細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體 規(guī)格 0.1ml
品名 規(guī)格 備注
VEGFR3 英文名稱: 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體3抗體 0.1ml
DNAI1 + 2 英文名稱: 軸絲中鏈動力蛋白抗體 0.2ml
Anti-beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
羧酸酯酶3(CES3)活性蛋白短通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Brachyspira spp.PCR
短古柏線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Cooperia curticeiPCR
杜氏利什曼蟲黑熱病病原蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Leishmania donovani()PCR
杜克雷嗜血桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Haemophilus ducreyiPCR
注意事項:
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。
2、雖然作用溫和,,但能硬化組織,,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。
3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,,影響免疫組化結(jié)果,。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,,有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),,然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4,、本產(chǎn)品對人體有害,,操作時請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。
5,、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作