海藻糖酶(TREH)真核蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：IL1R2重組狗 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 標簽) Protein
Nogo-A 軸索過度生長抑制因子-A(抗原 0.5mgNogo-A 軸索過度生長抑制因子-A(抗原)
CD9重組人 CD9 / Tspan-29 蛋白 (His 標簽) Protein
BBOX1 Protein Human 重組人 BBOX1 / Gamma-BBH 蛋白

樣品要求：

1、待標記樣品需保證90%以上的純度,，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分,，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明,。

2,、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉,，如果是液體,，濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3,、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA,、疊氮鈉成分。

4,、大分子蛋白應(yīng)提供分子量,、等電點、緩沖液成分及pH等信息,；小分子多肽需提供氨基酸序列,；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5,、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

產(chǎn)品名稱：海藻糖酶(TREH)真核蛋白

 英文名稱：Eukaryotic Trehalase (TREH)

TRE; TREA; Brush Border Membrane Glycoprotein; Alpha,Alpha-Trehalase; Alpha,Alpha-Trehalose Glucohydrolase

酶與激酶

 

相關(guān)產(chǎn)品：

Nogo-A 軸索過度生長抑制因子-A(抗原 0.5mgNogo-A 軸索過度生長抑制因子-A(抗原)

BBOX1 Protein Human 重組人 BBOX1 / Gamma-BBH 蛋白 (His & GST 標簽)

IL1R2重組狗 IL1R2 / IL1RB 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CHL1 Protein Mouse 重組小鼠 CHL-1 蛋白 (His 標簽)

CD9重組人 CD9 / Tspan-29 蛋白 (His 標簽) Protein

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年,。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用,。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題,。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃,。

(2)真核細胞表達的重組蛋白,。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性,。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑,。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑,。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑,。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

馬胃葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus equorumPCR 50T

梅克爾多元癌細胞病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Merkel Cell Polyomavirus(MCPyV)PCR 50T

滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Aeromonas salmonicidaPCR 50T

腦膜蠕蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Parelaphostrongylus teniusPCR 50T

MAPK4(Mitogen-activated protein kinase 4) 原活化蛋白4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

軸蛋白1Axin protein 1抗體 Anti-Axin1 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1068) 0酸化表皮生長因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml

B27添加劑 (原裝) 10ml Gibco

ZNF750 英文名稱： 鋅指蛋白750抗體 0.2ml

DTNBP1 英文名稱： 精神分裂癥易感基因抗體 0.1ml

軸蛋白1Axin protein 1抗體 Anti-Axin1 0.1ml

海藻糖酶(TREH)真核蛋白卟啉單胞菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porphyromonas spp.PCR

博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Fluoribacter bozemanaePCR

博爾納病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Borna Disease Virus（BDV）RTPCR

伯氏立克次氏體柯克斯體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Coxiella burnetii （）PCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。