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雙花扁豆凝集素（DBA）ELISA免費代測試劑盒實驗原理
閱讀：133 發(fā)布時間：2020-12-31| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15KB |
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雙花扁豆凝集素（DBA）ELISA免費代測試劑盒說明書
【中文名稱】：雙花扁豆凝集素（DBA）ELISA免費代測試劑盒
【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T。
【保存條件】：2-8℃低溫保存
【保質(zhì)期】：6個月,，所有試劑盒均提供批次,。
【試劑盒成分】：酶標板,，試劑,，標準品等。ELISA試劑盒檢測范圍：人,、綿羊,、小鼠、大鼠,、豬,、兔、山羊,、牛,、馬、豬、其它動物細胞因子,、植物細胞因子,、骨代謝、細胞凋亡,、激素內(nèi)分泌,、活性多肽、肝纖維化,、自身抗體,、血栓與止血、腫瘤,、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。 主要用于科研方面,，不用于臨床診斷,。可以用于檢測各種指標,。
雙花扁豆凝集素（DBA）ELISA免費代測試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中維生素C(VC)水平,。用純化的維生素C(VC)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入維生素C(VC),，再與HRP標記的維生素C(VC)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的維生素C(VC)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中維生素C(VC)濃度,。
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樣本處理及要求
1.組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
2. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
3. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl,，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
9.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存,。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 試劑盒2-8℃冷藏，保質(zhì)期6個月,。