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植物過氧化物酶（POD）酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中植物過氧化物酶（POD）水平,。用純化的植物過氧化物酶（POD）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶（POD），再與HRP標記的過氧化物酶（POD）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶（POD）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中植物過氧化物酶（POD）活性濃度,。

植物過氧化物酶（POD）酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（48mU/L）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

植物過氧化物酶（POD）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

24mU/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

12mU/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

6mU/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

3mU/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5mU/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

植物過氧化物酶（POD）酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間zuihao控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，zuihao做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔diyi孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

植物過氧化物酶（POD）酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月