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人白血病抗原（ALV Ag）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法
閱讀：105 發(fā)布時間：2020-1-10| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 19.7KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 105次 |
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人白血病抗原（ALV Ag）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中白血病抗原（ALV Ag）表達,。
人白血病抗原（ALV Ag）酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白血病抗原（ALV Ag）表達。用純化的抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中白血病抗原（ALV Ag）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中人白血病抗原（ALV Ag）的存在與否。
試劑盒組成
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
人白血病抗原（ALV Ag）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1.編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為白血病抗原（ALV Ag）陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為白血病抗原（ALV Ag）陽性
人白血病抗原（ALV Ag）酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月