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小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）ELISA試劑盒使用說明書
閱讀：114 發(fā)布時間：2019-1-16| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 28.2KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 114次 |
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小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）的活性,。
小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）ELISA試劑盒實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）水平,。用純化的小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH），再與HRP標記的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）活性濃度,。
試劑盒組成：
試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1個
1個
酶標包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
標準品：1800U/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶標試劑
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
樣品稀釋液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑A液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑B液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
濃縮洗滌液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）ELISA試劑盒樣本處理及要求：
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。
血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。
尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在,、第二孔中分別加標準品100μl，然后在,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后從孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為1200U/L,，800U/L，400U/L,，200U/L,，100U/L）,。
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
溫育：操作同3,。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）ELISA試劑盒注意事項：
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間建議控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
請每次測定的同時做標準曲線,，建議做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
底物請避光保存。
嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
本試劑不同批號組分不得混用,。
如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
試劑盒性能：
樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990以上。
批內與批見應分別小于9%和11%
檢測范圍：
45U/L–1600U/L
保存條件及有效期：
試劑盒保存：2-8℃,。
有效期：6個月