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犬凝血因子Ⅶ （FⅦ） ELISA檢測試劑盒技術參數(shù)
閱讀：152 發(fā)布時間：2018-10-11| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 63.9KB |
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試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被犬凝血因子Ⅶ (FⅦ)捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的犬凝血因子Ⅶ (FⅦ)呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用,。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。
標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白,；預處理后的樣本無需稀釋,，直接取10μL加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
無
標準品（480U/L）
0.6mL
0.6mL
按說明書進行稀釋
標準品稀釋液
6mL
3mL
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
犬凝血因子Ⅶ （FⅦ） ELISA檢測試劑盒按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
無
底物B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：480,、240,、120、60,、30,、15 U/L.
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；
隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標,，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 U/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。
4. 重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
6. 犬凝血因子Ⅶ （FⅦ） ELISA檢測試劑盒有效期：6個月