化工儀器網(wǎng)
資料下載
小鼠信號素3A（SEMA3A）ELISA試劑盒使用方法
閱讀：104 發(fā)布時間：2018-7-3| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 63.9KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 92次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 104次 |
| 免費(fèi)下載 | 點擊下載 |
小鼠信號素3A（SEMA3A）ELISA試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被信號素3A（SEMA3A）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯
色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的信號素3A（SEMA3A）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
小鼠信號素3A（SEMA3A）ELISA試劑盒操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明
書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度,。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻,。
小鼠信號素3A（SEMA3A）ELISA試劑盒試劑盒組成
名稱96 孔配置48 孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0,、5、10,、20,、40、80 ng/mL
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋,，即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水,。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次,。
2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5 次,。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 每孔加入底物A,、B 各50μL,，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi),，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。
小鼠信號素3A（SEMA3A）ELISA試劑盒結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對應(yīng)
OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣
本濃度值。