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人白喉類毒素抗體（DT Ab）酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
閱讀：182 發(fā)布時(shí)間：2018-6-5| 提 供 商 | 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 64KB |
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人白喉類毒素抗體（DT Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白喉類毒素抗體（DT Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，可與樣品中白喉類毒素抗體（DT Ab)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人白喉類毒素抗體（DT Ab)的存在與否,。
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔,、陽(yáng)性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
人白喉類毒素抗體（DT Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié)：
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為白喉類毒素抗體（DT Ab)陰性
陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為白喉類毒素抗體（DT Ab)陽(yáng)性
,。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存,。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。
人白喉類毒素抗體（DT Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月