化工儀器網(wǎng)
資料下載
人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒使用說明書
閱讀：115 發(fā)布時間：2018-5-22| 提 供 商 | 上海研生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 64KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 75次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 115次 |
| 免費下載 | 點擊下載 |
人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒試驗原理：
Caspase-3試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Caspase-3濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將Caspase-3和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中Caspase-3的濃度呈比例關系,。
自備材料
蒸餾水,。
加樣器：5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存,。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空轉移趨化生長因子β1孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘。避免光照,。
取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果,。
在450nm波長處測定各孔的OD值,。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。
人胱天蛋白酶3ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的Caspase-3標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的Caspase-3含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
3,、檢測值范圍：0-40ng/ml
4、敏感度： 0.1 ng/ml