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亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR試劑盒使用方法

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

按照試劑盒操作說明或者微生物樣品處理方法做好樣品前處理,。

1.2 DNA 提取

根據(jù)您實驗室的具體情況和樣品類型,，選擇適當(dāng)?shù)奶崛〔呗苑椒?。為了使實驗結(jié)果穩(wěn)定,、有效,、可靠，我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取,，嚴(yán)格按照對應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行操作,，樣本核酸提取過程中應(yīng)避免污染，提取好的模板樣品如不能立即檢測,，建議-15℃以下保存,。

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2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

2.1 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫（20～25℃），注意避免強(qiáng)光照射,，待溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s,，使用低吸附吸頭分液取樣，避免試劑損失和浪費,。

2.2 根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份,，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑

煙曲霉反應(yīng)液

煙曲霉擴(kuò)增液

用量（樣本數(shù)為N）

19.5μL

0.5μL

2.3 在適當(dāng)容積的無菌離心管中加入上述試劑,，充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s,，按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯(lián) PCR 反應(yīng)管中。

2.4 蓋緊八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋, 并注意做好相應(yīng)標(biāo)識（請標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋兩端突出部位,，切勿標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋中間,，以免影響信號采集）。將 PCR 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū),，剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存,。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1.2 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,，短暫離心,，核酸加樣過程中應(yīng)避免污染。