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雙孢蘑菇(白蘑菇,、洋蘑菇)操作步驟如下：

1 液體石蠟的準(zhǔn)備 選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟，將液體石蠟分裝加塞,，用牛皮紙包好,，采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌：121℃濕熱滅菌30min，置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分,，經(jīng)無(wú)菌檢查后備用,。160℃干熱滅菌2個(gè)小時(shí)，冷卻后,，經(jīng)無(wú)菌檢查后備用,。

2 斜面培養(yǎng)物的制備   參照定期移植法。

3 灌注石蠟  將無(wú)菌的液體石蠟在無(wú)菌條件*入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右,，使菌體與空氣隔絕,。

4 保藏 4.1　注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫（4～6℃）干燥處保藏，保藏時(shí)間2～10年,。 4.2　保藏期間應(yīng)定期檢查,，如培養(yǎng)基露出液面，應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充無(wú)菌的液體石蠟,。

5 恢復(fù)培養(yǎng)   恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)繁殖后,，再重新轉(zhuǎn)接一次,。

培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,，用火焰加熱其頂端,，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端,。

2,、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi),，輕輕振蕩,，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前,，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng),，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4,、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5,、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏,。