技術(shù)文章
轉(zhuǎn)基因元件pTa29啟動子LAMP試劑盒反應
閱讀:106 發(fā)布時間:2024-8-23轉(zhuǎn)基因元件pTa29啟動子LAMP試劑盒反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),,其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學中小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應液加好后,,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應,。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,,不一定要用同位素,無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術(shù)概論,。