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脂蛋白純化試劑盒使用方法
閱讀：233 發(fā)布時(shí)間：2022-8-23脂蛋白純化試劑盒使用方法:
準(zhǔn)備：第一次使用本試劑盒時(shí)需要將所有 DNase I 干粉倒入溶液 B 中，輕柔顛倒 使 DNase 干粉溶解,。未用完的部分需要放-20℃保存，最好在一個(gè)月內(nèi)完,，否則 DNase 將逐漸失去活性,。此外,，最好在實(shí)驗(yàn)前 1 小時(shí)將溶液 B 冰浴預(yù)冷。
用法一：小量制備（主要用于上樣量比較小的 SDS-PAGE 電泳等實(shí)驗(yàn)）
1、 收集 20-40 mL 過夜培養(yǎng)的細(xì)菌飽和培養(yǎng)液（OD420 在 1.5 左右即可）,，2500 g 室溫離心 10 分鐘后棄上清,。
2、 加入 2 mL 溶液 A,，輕柔吹打，將細(xì)菌重懸于溶液 A 中,。
3,、 2500 g 室溫離心 10 分鐘后棄上清。 4,、 加入 0.5 mL 溶液 B（必須已經(jīng)提前加入了 DNase I 干粉）,，輕柔吹打使細(xì)菌 重懸,。注：如果細(xì)菌起始量沒有 20-40 mL，溶液 A 的用量可以等比例降低,。 重懸在溶液 A 中的細(xì)菌可以放-80℃長期保存,。
5,、 用超聲或 French Press 方法裂解細(xì)胞,。如果用 French Press 方法，則需要 處理至少兩次,，每次的壓力為 9.65×10E7（=14000 psi）。注意：不論用哪 種裂解方法,，都必須在顯微鏡下檢查細(xì)菌是否已經(jīng)裂解，否則還需要重復(fù)細(xì)菌 裂解過程,，直到 80%以上的細(xì)菌都裂解為止,。
6,、 2500g 室溫離心 8 分鐘后小心轉(zhuǎn)移上清到新的 10 mL-15 mL 塑料離心管中 （如 Beckman Optima 臺(tái)式超速離心機(jī)離心管），棄沉淀（未破裂細(xì)胞）,。
7,、 在上清（細(xì)菌裂解液）中加入 5 mL 預(yù)冷的溶液 C，輕柔顛倒混勻后冰浴放置 30-60 分鐘,。其間可以輕柔顛倒混勻 3-5 次,。
8,、 用 Bechman Optima 臺(tái)式超速離心機(jī) 115，000g 4℃離心 60 分鐘,。也可以 使用其他冷凍超速離心機(jī),，但離心力應(yīng)該一致，否則有可能得不到沉淀,。
9、 小心移棄上清,，在沉淀中加入 0.2 mL 溶液 A,，充分吹打混勻,。
10,、用 Beckman Optima 臺(tái)式超速離心機(jī) 115，000g 4℃離心 60 分鐘,。也可 以使用其他冷凍超速離心機(jī),，但離心力應(yīng)該一致，否則有可能得不到沉淀,。 11、小心移棄上清,，所得沉淀放-20℃長期保存，也可以直接加入 0.1 mL 自備的,， 跟后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容的緩沖液（如 1×SDS-PAGE 上樣液中,，可從本公司購買）,， 所得膜蛋白的濃度將在 1mg/mL 左右,。
用法二：大量制備（主要用于上樣量比較大的 2D 電泳等實(shí)驗(yàn)）
1、 收集 200-400 mL 過夜培養(yǎng)的細(xì)菌飽和培養(yǎng)液（OD420 在 1.5 左右即可）,，2500 g 室溫離心 10 分鐘后棄上清。
2,、 加入 20 mL 溶液 A，輕柔吹打,，將細(xì)菌重懸于溶液 A 中,。
3,、 2500 g 室溫離心 10 分鐘后棄上清。
4、 加入 5 mL 溶液 B（必須已經(jīng)提前加入了 DNase I 干粉）,，輕柔吹打使細(xì)菌重懸,。注：如果細(xì)菌起始量沒有 200-400 mL，溶液 A 的用量可以等比例降低,。重懸在溶液 A 中的細(xì)菌可以放-80℃長期保存,。
5、 用超聲或 French Press 方法裂解細(xì)胞,。如果用 French Press 方法,，則需要處理至少兩次，每次的壓力為 9.65×10E7（=14000 psi）,。注意：不論用哪種裂解方法,，都必須在顯微鏡下檢查細(xì)菌是否已經(jīng)裂解，否則還需要重復(fù)細(xì)菌裂解過程,，直到 80%以上的細(xì)菌都裂解為止,。
6、 2500g 室溫離心 8 分鐘后小心轉(zhuǎn)移上清到干凈的玻璃燒杯中,，棄沉淀（未破裂細(xì)胞）,。
7、 在上清（細(xì)菌裂解液）中加入 50 mL 預(yù)冷的溶液 C,，輕輕在冰浴中攪拌混勻30-60 分鐘,。注：可以在大燒杯中裝冰，然后將裝有樣品的小燒杯放入,，在放入干凈的攪拌子,，以zui低速度攪拌。
8,、 用 Beckman Type 55.2 Ti 轉(zhuǎn)頭 115,，000g 4℃離心 60 分鐘。也可以使用其他冷凍超速離心機(jī),，但離心力應(yīng)該一致。
9,、 小心移棄上清,，在沉淀中加入 2 mL 溶液 A,，充分吹打混勻,。
10,、用 Beckman Type 55.2 Ti 轉(zhuǎn)頭 115,，000g 4℃離心 60 分鐘,。也可以使用其他冷凍超速離心機(jī)，但離心力應(yīng)該一致,。
11、小心移棄上清,，所得沉淀放-20℃長期保存或溶解在 1 mL 自備的，跟后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容的緩沖液（如 1×等電點(diǎn)電泳上樣液,，可從本公司購買），所得膜蛋白的濃度在 1mg/mL 左右,。
溶菌酶（LZM）測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）
溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品
微球菌粉
解脲（溶脲）支原體快速培養(yǎng)基（UU培養(yǎng)基）
人型支原體快速培養(yǎng)基
細(xì)胞凋亡測試盒（TdT酶,、稀釋液、POD）
細(xì)胞凋亡測試盒（全套）
（TdT介導(dǎo)的原位末端切口平移雙標(biāo)記法）
唾液酸（SA）測試盒（帶SA標(biāo)準(zhǔn)）
肝素溶液
肝素抗凝管
肝素抗凝管
產(chǎn) 品 名 稱
鉀（K）測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）
鈉（Na）測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）
氯（Cl）測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）