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技術(shù)文章

麥ubiquitine 基因核酸檢測試劑盒試劑準備

閱讀:249          發(fā)布時間:2021-10-13

麥ubiquitine 基因核酸檢測試劑盒試劑準備:


1. DNA模板


2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,??梢允荄NA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計,。因此,,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)


3.10×PCR Buffer


4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM


5.Taq酶操作步驟 


1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。


      10×PCR buffer             5μl


      dNTP mixl                 4μl


       引物1(10pM)               2μl


       引物2(10PM)              2μl


       Taq酶(2U/μl)            1μl


      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl


      加ddH2O至               50 μl


    視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。


2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min,。


3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。


4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。


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