技術文章
大鼠血管緊張素轉換酶(ACE)elisa試劑盒操作方法簡介
閱讀:493 發(fā)布時間:2019-5-8大鼠血管緊張素轉換酶(ACE)elisa試劑盒操作方法簡介
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應孔中加0.1ml,,4℃ 過夜。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次。
2,、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3、加酶標抗體:于各反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌,。
4,、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘。
5,、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。