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人清道夫受體A(SR-A)ELISA檢測試劑盒操作步驟
閱讀:345 發(fā)布時(shí)間:2019-4-17人清道夫受體A(SR-A)ELISA檢測試劑盒說明書標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人清道夫受體A(SR-A)ELISA檢測試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋,。
720ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
360ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
180ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
90ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
45ng/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
2
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5 倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30 秒后棄去,,如此
重復(fù)5 次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
10 分鐘,。
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。