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ELISA試劑盒洗滌很重要及抗體濃度須優(yōu)化
閱讀:504 發(fā)布時(shí)間:2019-3-27ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,,不外乎固定抗原,,添加一抗、二抗和底物,,間中夾雜著
洗滌和封閉,。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,,如果做得不太好,,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)
。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),,我們是否能獲得有意義的信息,,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景
噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷,。如何降低ELISA的背景,,下面有一些tips。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,,其實(shí)很重要,,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)
殘留在微孔板中,,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,,可增加洗滌液中的鹽濃度,,這會(huì)阻止非
特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,,而您懷疑洗滌不夠時(shí),,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
抗體濃度須優(yōu)化
我們通常會(huì)follow師兄師姐留下來的操作步驟,,但是如果試劑稍有不同,,則可能需要優(yōu)化抗體
的量。記住,,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景,。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗或二抗,。
檢測(cè)試劑要適量
另一點(diǎn)也很顯而易見:切勿使用過多的檢測(cè)試劑,。如果濃度過高,或者未正確稀釋,,則會(huì)導(dǎo)致
高背景,。也不要顯色過度,如有必要,,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液,。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔(dān)心,,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,,
并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,,相信很快就會(huì)有漂亮的結(jié)果,。