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   雙抗夾心 ELISA 試劑盒的反應(yīng)時(shí)間

   在保證 ELISA 有效檢測(cè)病原菌的前提下,，快速,、方 便也是雙抗夾心 ELISA 的必要條件,。雙抗夾心 ELISA 從 加入待測(cè)抗原到得出結(jié)果,，檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 共需 要 5h 左右,，而間接 ELISA 則需要 7h(包被 37℃，2h)或 者 17h(包被 4℃guo夜),。本論文篩選出的雙抗夾心 ELISA 檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 省去封閉這一步驟,。在間接 ELISA 測(cè)定抗原中，封閉一般是*的,，因?yàn)榘?被不同濃度抗原不一定可以*覆蓋固相載體表面,，如 果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗 直接被吸附到固相載體上,，產(chǎn)生非特異性顯色而使檢測(cè) 結(jié)果偏高,。但是對(duì)于雙抗體夾心 ELISA 來(lái)說(shuō)，在包被 捕獲抗體時(shí)已經(jīng)使固相載體飽和,，已經(jīng)沒(méi)有多余的吸附 力來(lái)吸附隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗,，這都說(shuō)明 了雙抗夾心 ELISA 有不需要封閉的可能，通過(guò)正交試驗(yàn) 結(jié)果也證明不封閉可以達(dá)到理想實(shí)驗(yàn)效果,，而且還縮短 了整個(gè)檢測(cè)流程和時(shí)間,，說(shuō)明只要酶標(biāo)記物是高活性的 并且操作時(shí)洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意結(jié)果。雙抗夾心 ELISA 檢測(cè)法的特異性和靈敏性 抗原抗體的結(jié)合實(shí)際上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間,，由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空 間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特 異性。但這種特異性并不是的,，假使兩種化合物 有著部分相同的結(jié)構(gòu),，在抗原抗體反應(yīng)中可能出現(xiàn)交叉 反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌 O157:H7 及其他菌株共 10 株作 為抗原用來(lái)檢測(cè)本方法的特異性,，結(jié)果顯示大腸桿菌 O157:H7 呈明顯陽(yáng)性反應(yīng),，其余各菌株均呈陰性反應(yīng)， 說(shuō)明本方法對(duì)大腸桿菌 O157:H7 具有明顯的檢測(cè)特異 性,，而對(duì)所測(cè)定的其它菌株無(wú)交叉反應(yīng),。

   本論文所建立的雙抗夾心 ELISA 方法對(duì)純培養(yǎng)的 大腸桿菌 O157:H7 檢出限均105CFU/ml，Kerr 和 Chart 等[6]建立的雙抗夾心 ELISA 檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 的檢測(cè)限為 10 5 CFU/ml ,，趙志晶和劉秀梅[7] 建立的雙抗夾心ELISA 檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 的檢測(cè)限為 104CFU/ml,，兩 者均用單克隆抗體作為檢測(cè)抗體，而本方法使用 IgY 抗 體與兔多克隆抗體,，制備相對(duì)比單克隆抗體簡(jiǎn)單,，對(duì)試 劑、成本要求也相對(duì)降低,，其效果基本達(dá)到檢測(cè)要求,。