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elisa檢測試劑盒測抗體的血清的具體操作
閱讀：989 發(fā)布時間：2018-9-6 大部分elisa檢測試劑盒檢測均以血清為標(biāo)本,。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,，應(yīng)注意避免溶血,，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中,，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,。如有細(xì)菌污染,，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng),。一般說來,，在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,，使間接法的試劑本底加深,。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡,?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測,。
具體注意事項：
1,、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),，其有類似過氧化物的活性,，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
2,、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長,，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
3、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周,，如為有菌操作，則建議冰凍保存,。樣本的長時間保存,，應(yīng)在-70℃以下,。
4、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,，從而引起假陰性結(jié)果。此外,，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可,。
5,、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測,。