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產(chǎn)品簡介
人白介素2受體（IL-2R）文獻引用Elisa kit線性范圍廣,，靈敏度高,，低背景,，高特異性,，高靈敏度，操作便捷,，結(jié)果穩(wěn)定,！凡購買本公司試劑盒，均可享受免費代測,，全程提供技術(shù)服務,，值得信賴的高品質(zhì)試劑盒供應商，我們協(xié)助您盡快實現(xiàn)科研使命
詳細介紹
人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit適用于以下樣本的測試
血清,、血漿–組織勻漿–腹水–細胞,、培養(yǎng)上清
本試劑盒僅供研究，不用于臨床診斷
一,、實驗原理：
本試劑盒采用競爭法檢測樣本中人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit的含量,。向預先包被了抗體的酶標孔中加入樣本，再加入生物素標記的識別抗原,，在37℃下孵育30min,，兩者與固相抗體競爭結(jié)合形成免疫復合物，經(jīng)PBST洗滌除去未結(jié)合的生物素抗原,，然后加入親和素-HRP,，在37℃下孵育30min，親和素-HRP與生物素抗原結(jié)合,，洗滌后結(jié)合的HRP催化TMB（四甲基聯(lián)苯胺）成藍色,，隨后在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色，在450nm波長下有吸收峰,，吸光值與樣本中抗原的濃度成負相關(guān)
二,、試劑盒組成：
注：
a、試劑盒中“樣品稀釋液”為0.05M的PBS,，“終止液”為2M的H2SO4,，洗滌液為含0.15%吐溫-20的PBST，如不夠可自行配制,。
b,、不同公司的緩沖體系存在較大差異，請勿將本試劑盒的試劑與其他公司的試劑混用以免影響實驗結(jié)果,。
c,、濃縮洗滌液在低溫下會有少量鹽類析出,，稍微加溫后即會消失，不影響使用,。
三,、試劑盒保存
本試劑盒可以在2-8℃下保存6個月，在-20℃下可以保存更長的時間,。酶標板為真空包裝,，板條可以拆卸，拆開以后如一次不能用完,，請放入提供的密封袋中,，放入干燥劑，2-8℃保存,，在一個月之內(nèi)仍然有效,。試劑不能反復凍融,。
四,、需要而未提供的試劑和器材
a、37℃恒溫箱,。
b,、標準規(guī)格酶標儀。
c,、精密移液器及一次性吸頭
d,、雙蒸水或超純水
e、干凈的試管或Eppendof管
f,、吸水紙
g,、自動洗板機或8道排槍
h、ELISA數(shù)據(jù)處理軟件,，推薦使用ELISACalc
i,、500ml燒杯的和適當量程的量筒
五、試劑準備
a,、使用前所有試劑應置于室溫平衡至少30分鐘,。
b、本試劑盒可以直接加樣,，如濃度過高,，可以進行適當比例的稀釋，計算時應將結(jié)果乘以稀釋的倍數(shù)（建議先做預實驗,，以確定稀釋倍數(shù)）,。
c、洗滌液為25倍濃縮液,，使用前將所有洗滌液倒入500ml或1L的燒杯中,，用雙蒸水定容到500ml即為工作液,。
d、標準品的稀釋：先用標準品/樣品稀釋液漿標準品凍干粉定容到150μl,，然后漩渦混勻30秒即為標準品原液(24小時內(nèi)用完),。取5支干凈的Eppendorf管，每管加150μl的標準品稀釋液,，分別標記上32ng/ml,，16ng/ml，8ng/ml,，4ng/ml,，2ng/ml。取150μl標準品原液加入標記32ng/ml 的管中,，混勻后同樣取出150μl,，加入下一管，以此類推直至后一管,。] （見下圖）
零孔：直接加標準品/樣品稀釋液,。
原液64ng/ml 32ng/ml 16ng/ml 8ng/ml 4ng/ml 2ng/ml
e、生物素抗原的稀釋：低速離心,，然后抽取生物素抗原稀釋液1ml到濃縮型生物素抗原中,，漩渦混勻15秒，至凍干粉*溶解,，然后將所有液體倒入稀釋液瓶中,，漩渦混勻后即為生物素抗原工作液(一周內(nèi)用完)。
f,、親和素-HRP的稀釋：低速離心,，使?jié)饪s液全部沉到管底，將濃縮親和素-HRP全部轉(zhuǎn)移到稀釋液瓶中,，漩渦混勻后即為親和素-HRP工作液(一周內(nèi)用完),。
六、樣本前處理
a,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。
b,、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。
c,、血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
d,、尿液：用無菌管收集,，2000-3000轉(zhuǎn)/分，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
e,、細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
f、組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。2000-3000轉(zhuǎn)/分,，離心 20分鐘左右。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
七,、洗板方法
a,、手工洗板：先洗去酶標孔中的的液體，在吸水紙上拍干,，然后每孔加入300μl稀釋好的洗滌液,，輕輕搖晃30秒，然后甩掉,，在吸水紙上拍干,，重復4-5次。
b,、洗板機洗板：洗板機洗板比較便捷,，但應操作熟練后使用。
八,、詳細操作程序
a,、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
b,、空白孔不加樣,，只加顯色劑A，B和終止液用于調(diào)零,。
c,、標準品孔：每孔加入稀釋好的標準品50μl，零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl,，然后加入生物素抗原工作液50μl,。
d、樣品孔：加入樣品50μl,，然后加入生物素抗原工作液50μl,。
e、輕輕搖晃，蓋上封板膜,，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min,。
f、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用,。
g,、*次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
h,、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中,，輕輕搖晃，蓋上封板膜,，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min,。
i、第二次洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
j,、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘,。
k,、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
l,、測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行,。
m、計算：根據(jù)濃度和OD值算出標準曲線的回歸方程，建議用計算軟件進行計算,，推薦使用人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kitcalc進行計算,，擬合模型選用logistic曲線（四參數(shù)）。標曲示意圖如下：
九,，操作總結(jié)
準備試劑,，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，生物素抗原,，37℃反應30分鐘
洗板5次,，加入親和素-HRP，37℃反應30分鐘
洗板5次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色10分鐘
加入終止液
10分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
10,、性能參數(shù)
a,、批內(nèi)差：CV＜10%
b、批間差：CV＜12%
c,、檢測限：0.2-60ng/ml
d,、保 存：2-8℃
e、規(guī) 格：96T/盒
f,、有效期：6個月(2-8℃)
11,、問題分析
購買人白介素2受體(IL-2R)文獻引用Elisa kit聲明：1、限于現(xiàn)有條件及科技水平,，尚不能對所有原料進行全面分析,，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。
2,、終的實驗結(jié)果與試劑的有效性,、實驗者的相關(guān)操作及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務必準備充足的待測樣本并預留備份,，并根據(jù)預實驗結(jié)果調(diào)整樣本濃度,。
3、試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護工作,。特別是檢測血液或者其他體液樣品時,，請按國家生物試驗室安全防護條例執(zhí)行。