化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒DNA 只存在于細胞核內(nèi),，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細胞核中，要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用,，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質(zhì)
詳細介紹
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒DNA 只存在于細胞核內(nèi),，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細胞核中，要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用,，首先需要制備能夠與 DNA 作用的
天然細胞核蛋白質(zhì),。目前、細胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣,，一次處理大量
樣品時尤其不便,，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞核蛋
白的微量提取,，它具有下列特點：
1. 提取制備過程簡便,，只需要一小時。
2. 實驗重復(fù)性好,，尤其適合同時處理多個樣品,。
3. 可用于培養(yǎng)的動物細胞，也可以用于組織細胞,。
4. 制備的核蛋白能保持天然活性,，可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實
驗(gel shift assay),、免疫共沉淀、Western Blotting,、DNA 足跡圖實驗和甲
基化干擾實驗酶活性測定等研究,。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 30 次包裝 100 次包裝
溶液 A 91203A 15 mL 50 mL
使用手冊 91203sc 1 份 1 份
運輸及保存 低溫運輸,，4℃保存,，有效期一年,。
自備試劑 PBS 緩沖液,，PMSF 溶液，DTT 溶液
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒使用方法 1,、 對貼壁細胞：將 5×105-7 個細胞培養(yǎng)到覆蓋率為 55-65%,，吸棄培養(yǎng)基，用
自備的預(yù)冷 PBS 緩沖液洗滌細胞一次,，將細胞從壁上小心刮下,，轉(zhuǎn)移到預(yù)冷
的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘,，小心棄上清。直接進入第三
步進行后續(xù)處理,。
2、 對懸浮細胞：直接將 5×105-7個的懸浮細胞轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 預(yù)冷的塑料離心管
中,，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘,，用自備的預(yù)冷的 PBS 洗滌細胞沉淀一次，
3000 rpm 離心 5 分鐘,，小心棄上清。直接進入第三步處理細胞沉淀,。說明：
懸浮細胞制備胞漿的效果一般好于貼壁細胞。
3,、 在細胞沉淀中加入相當于沉淀細胞體積 5 倍或更多的預(yù)冷的溶液 A 重懸細胞,，
一般不超過 300 uL-500 uL 溶液 A,。溶液 A 在臨用前zui加入終濃度為 0.2
mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不穩(wěn)定,，只能
臨用提加入,。
4、 冰浴靜置 10 分鐘,。
5,、 將細胞轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器中（溫和破裂細
胞用）,，上下勻漿 10-15 次（為檢查效果，可取少量裂解物與自備的 0.01%
Trypan Blue 溶液混合,，在顯微鏡下觀察,，只有破裂細胞的細胞核才能染色，
完整細胞無色,。如果需要，可增加勻漿次數(shù)直到 80-90%以上的細胞裂解為
止）,。
6,、 小心轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管中,，4℃ 17000g 離心 15 分鐘，線粒體,，細胞核等
細胞器將沉淀到管底,。
保留上清（胞漿部分）待用,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 10×PBS 緩沖液（100215-250）,，PMSF 溶液（100833-5）,，1M DTT 溶液
（60405-10）